Um die Pigmente aus den Chloroplasten extrahieren zu können, werden sie in einem Isolationspuffer suspendiert. Um die Pigmente aus den Chloroplasten extrahieren zu können, müssen wir zuerst den Puffer loswerden. Wie trennt man die Chloroplasten am besten vom Puffer? mit einer Zentrifuge abtrennen
Wie isoliert man einen Chloroplasten?
Bei der Chloroplasten-Isolierungsmethode wird die Zellwand mechanisch mit einem Mixer oder Homogenisator aufgebrochen. Dann werden das unversehrte Blattgewebe und die Zelltrümmer durch Filtration entfernt. Die Chloroplasten werden durch Zentrifugation mit einem Percoll-Gradienten gesammelt.
Wie stellt man einen Chloroplasten-Isolationspuffer her?
Bereiten Sie die erforderliche Menge an 1X Chloroplasten-Isolierungspuffer vor, indem Sie die 2X Pufferlösung 1:1 mit dH2O-Wasser verdünnen Fügen Sie 10 µl der 10% BSA-Lösung pro ml 1X Chloroplasten hinzu Isolationspuffer. Fügen Sie kurz vor der Verwendung 1 µl DTT pro 1 ml Chloroplasten-Isolationspuffer hinzu. Kennzeichnen Sie diesen Puffer als „Vollständiger Puffer“.
Was ist in einem Chloroplasten-Isolationspuffer?
DNA-Isolierungspuffer bestand aus 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM EDTA und 1 mM DTT Die Chloroplastenlyse wurde durch Inkubation der Chloroplastenpellet mit 8 ml DNA-Isolationspuffer, 1,5 ml 20 % SDS, 20 µl 2-Mercaptoethanol und 30 µl Proteinase K (10 mg/ml) in ein Zentrifugenröhrchen bei 55 °C für 4 h.
Was ist der pH-Wert des Puffers, der verwendet wird, um Spinatblätter im Chloroplasten-Isolierungsprotokoll zu homogenisieren?
Spinat ist voller guter Chloroplasten und sie lassen sich leicht isolieren. Sie müssen die Blätter in einen k alten Mixer mit 0,1 M Phosphatpuffer, pH 7,5 und 0,5 M Saccharose geben, damit sie nicht platzen.
