Inhaltsverzeichnis:
- Im Folgenden finden Sie eine Übersicht über die verschiedenen Schritte eines indirekten Immunfluoreszenz-Färbeprotokolls
- Wie führt man Immunfluoreszenz durch?
- Wie verwendet man Immunfluoreszenz in einer Zelle?
- Was ist ein Beispiel für Immunfluoreszenz?
- Wozu dient die Immunfluoreszenzfärbung?
Video: Wie macht man Immunfluoreszenz?
2024 Autor: Fiona Howard | [email protected]. Zuletzt bearbeitet: 2024-01-10 06:33
Im Folgenden finden Sie eine Übersicht über die verschiedenen Schritte eines indirekten Immunfluoreszenz-Färbeprotokolls
- Experimentplanung und Probenvorbereitung. …
- Probenfixierung. …
- Zellpermeabilisierung. …
- Blockieren. …
- Inkubation des primären Antikörpers. …
- Sekundäre Antikörper-Inkubation. …
- Gegenfärbung und Montage.
Wie führt man Immunfluoreszenz durch?
Alle Inkubationsschritte finden bei Raumtemperatur statt
- Waschen Sie die Zellen zweimal und legen Sie das Deckglas mit umgedrehten Zellen vorsichtig mit einer Pinzette in die befeuchtete Kammer.
- 10 Minuten mit 4 % Formaldehyd fixieren und 3 × waschen.
- 15–20 Minuten mit 0,1 % TX-100/PBS permeabilisieren und 3 × waschen.
Wie verwendet man Immunfluoreszenz in einer Zelle?
Immunfluoreszenzprotokoll für adhärente Zellen
- Seed 1–1,5 x104 Zellen pro Vertiefung eines Objektträgers mit 4 Kammern in 500 ml Kulturmedium. Inkubieren bei 37°C bei 5% CO2.
- 32–36 Stunden nach der Zellaussaat das Zellkulturmedium entfernen und die Zellen dreimal mit 500 µl 1x PBS spülen.
Was ist ein Beispiel für Immunfluoreszenz?
Zum Beispiel könnte ein Forscher primäre Antikörper in einer Ziege herstellen, die mehrere Antigene erkennen, und dann farbstoffgekoppelte sekundäre Kaninchen-Antikörper verwenden, die die konstante Region des Ziegenantikörpers erkennen (" Kaninchen-Anti-Ziege"-Antikörper).
Wozu dient die Immunfluoreszenzfärbung?
Immunfluoreszenz (IF)-Färbung ist eine weit verbreitete Technik in der biologischen Forschung und klinischen Diagnostik IF verwendet fluoreszenzmarkierte Antikörper, um spezifische Zielantigene nachzuweisen. Gefolgt von der Bildgebung ist es eine sehr direkte Technik, da Sie tatsächlich etwas sehen können.
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Wie kann man die Hintergrundfärbung bei der Immunfluoreszenz reduzieren?
Um die unspezifische Antikörperbindung und damit das Hintergrundsignal zu verringern, wird empfohlen, vor der Inkubation mit Antikörpern eine Blockierungslösung zu verwenden Die wirksamste Blockierungslösung wird sein, das Serum derselben Spezies enthält, in der der sekundäre Antikörper gezüchtet wurde .
