Um die unspezifische Antikörperbindung und damit das Hintergrundsignal zu verringern, wird empfohlen, vor der Inkubation mit Antikörpern eine Blockierungslösung zu verwenden Die wirksamste Blockierungslösung wird sein, das Serum derselben Spezies enthält, in der der sekundäre Antikörper gezüchtet wurde.
Wie verhindern Sie Flecken im Hintergrund?
Die Dicke der Gewebeschnitte verringern kann dazu beitragen, die Hintergrundfärbung weiter zu reduzieren. Versuchen Sie, dünnere Abschnitte für eine sauberere IHC zu schneiden. Es ist auch wichtig, darauf zu achten, die Schnitte nicht austrocknen zu lassen, da das Trocknen zu einer starken unspezifischen Färbung führen kann.
Wie optimiert man die Immunfluoreszenz?
Immunfluoreszenzmikroskopie: 10 technische Tipps für den Erfolg
- Zellfixierung und Permeabilisierung. …
- Antikörperspezifität. …
- Unter Verwendung der geeigneten Antikörperverdünnung. …
- Optimierung von Puffern und Blockierungsmitteln. …
- Eine angemessene Zelldichte verwenden. …
- Mehrfachfärbung. …
- Sekundärantikörper. …
- Hintergrund reduzieren.
Was verursacht Hintergrundflecken?
Hintergrundfärbung kann durch ungeeignete Antikörperbindung oder durch Fehler während der Vorbereitung des Gewebeschnitts verursacht werden.
Reduzieren sekundäre Antikörper Hintergrundsignale?
F(ab)-spezifische Sekundärantikörper können dabei helfen, das Hintergrundsignal zu reduzieren, indem die unspezifische Bindung von den IgG-Proteinen, die durch den Sekundärantikörper in Geweben gefunden werden, eliminiert wird.
