Richtlinien zum Auftauen von Zellen
- Gefrorene Zellen schnell (< 1 Minute) in einem 37°C warmen Wasserbad auftauen.
- Verdünnen Sie die aufgetauten Zellen langsam, bevor Sie sie inkubieren, indem Sie vorgewärmtes Wachstumsmedium verwenden.
- Aufgetaute Zellen mit hoher Dichte ausplattieren, um die Rückgewinnung zu optimieren.
- Verwenden Sie immer die richtige aseptische Technik und arbeiten Sie in einer Laminarströmungshaube.
Warum werden die Zellen aufgetaut?
Es ist wichtig, die Zellen richtig aufzutauen, um die Lebensfähigkeit der Kultur zu erh alten und eine schnellere Erholung der Kultur zu ermöglichen. Einige Kryoschutzmittel, wie DMSO, sind oberhalb von 4 °C toxisch. Daher ist es wichtig, dass Kulturen schnell aufgetaut und in Kulturmedium verdünnt werden, um die toxischen Wirkungen zu minimieren.
Wie läuft das Auftauen ab?
Auftauen ist der Prozess, bei dem ein gefrorenes Produkt auf eine Temperatur (normalerweise über 0°C) gebracht wird, bei der kein Resteis mehr vorhanden ist, d. h. „auftauen“. Auftauen wird oft einfach als Umkehrung des Gefrierprozesses betrachtet.
Was ist der beste Weg, Zellen einzufrieren?
Gefrieren Sie die Zellen langsam, indem Sie die Temperatur mit einem geregelten Kryo-Gefrierschrank oder einem Kryo-Gefrierbehälter wie „Mr. Frosty”, erhältlich von Thermo Scientific Nalgene Labware (Nalge Nunc). Verwenden Sie immer das empfohlene Einfriermedium.
Wie taut man eine Primärzelle auf?
Wischen Sie die Außenseite des Fläschchens mit Zellen mit 70 %igem Ethanol oder Isopropanol ab. Drehen Sie die Kappe in einer Biosicherheitswerkbank um eine Vierteldrehung, um den Innendruck abzubauen, und ziehen Sie sie dann wieder fest. Zellen schnell auftauen in einem 37°C warmen Wasserbad durch leichtes Schwenken des Fläschchens auftauen. Entfernen Sie das Fläschchen, wenn eine kleine Menge Eis zurückbleibt.
