Der bimolekulare Fluoreszenzkomplementationstest (BiFC) ist ein Verfahren zur direkten Visualisierung der Protein-Protein-Wechselwirkung in vivo unter Verwendung von Live-Cell-Imaging oder fixierten Zellen. … BiFC wurde erstmals von Hu et al. beschrieben.
Wie funktioniert die bimolekulare Fluoreszenzkomplementation?
Das Arbeitsprinzip von BiFC basiert auf der Entwicklung eines fluoreszierenden Komplexes als Ergebnis der Assoziation zweier Segmente eines fluoreszierenden Proteins, wenn sie sich aufgrund der Protein-Protein-Wechselwirkung in den Fragmenten in unmittelbarer Nähe befinden, d.h., in BiFC wird ein Fluorophor in Amino- und Carboxyl-terminale Enden unterteilt.
Was ist der BiFC-Test?
bimolekularer Fluoreszenzkomplementations(BiFC)-Assay ermöglicht eine einfache und direkte Visualisierung von Proteininteraktionen in lebenden Zellen (45). Der BiFC-Ansatz basiert auf der Bildung eines fluoreszierenden Komplexes, wenn zwei Proteine, die an nicht fluoreszierende Fragmente eines fluoreszierenden Proteins fusioniert sind, miteinander interagieren (Abb.
Warum wird der BiFC-Test durchgeführt?
Die Idee von BiFC ist, GFP-Hälften zu exprimieren, die mit Ihren interessierenden Proteinen fusioniert sind Wenn die POIs interagieren, könnten Sie beide Hälften zusammenbringen, um ein funktionelles GFP zu erh alten. Wenn also eine Hälfte eines GFP in der Zelle exprimiert wird, überrascht es mich nicht, dass ein GFP-Antikörper dies erkennen kann.
Ist BiFC reversibel?
Die Irreversibilität von BiFC-Komplexen ist gut dokumentiert (10), und es scheint, dass die meisten, wenn nicht alle auf fluoreszierenden Proteinen basierenden BiFC-Systeme irreversibel sind (8, 33, 43, 48–51).
