Wenn Ihr Protein nicht die gleiche Größe wie Ihr Antikörper hat, können Sie mit 0.1M Glycin, pH2-3 eluieren und dann das interessierende Protein mit SEC vom Antikörper trennen (wie Superdex 200).
Was eluiert ein Protein?
Die Proteine werden durch einen Gradienten mit steigenden Mengen eines organischen Lösungsmittels, wie Acetonitril, eluiert. Die Proteine eluieren entsprechend ihrer Hydrophobizität. Nach der HPLC-Reinigung liegt das Protein in einer Lösung vor, die nur flüchtige Verbindungen enthält und leicht lyophilisiert werden kann.
Warum haben Proteine eine niedrige pH-Elution?
Die Verwendung von Puffern mit niedrigem pH-Wert zur Elution von Protein A ist dafür bekannt, dass sie zur Produktaggregation beiträgt Eine begrenztere Anzahl von Beweisen deutet jedoch darauf hin, dass ein niedriger pH-Wert möglicherweise nicht die einzige Ursache ist Ursache der Aggregation in der Protein-A-Chromatographie, vielmehr können andere Facetten des Prozesses wesentlich dazu beitragen.
Wie erfolgt die Elution?
In der analytischen und organischen Chemie ist Elution der Prozess der Extrahierung eines Materials aus einem anderen durch Waschen mit einem Lösungsmittel; wie beim Waschen von beladenen Ionenaustauscherharzen, um eingefangene Ionen zu entfernen. … Nachdem die Lösungsmittelmoleküle den Analyten verdrängt haben, kann der Analyt zur Analyse aus der Säule ausgetragen werden.
Wie viele Antikörper benötigen Sie für Coip?
Für routinemäßige Co-IP-Experimente ist der von mir verwendete Antikörper nicht mehr als 2 ug (In meinem Set reichen 1,4 - 2,0 ug Antikörper aus, um 2500-5000 ug einzufangen Proteinlysat.) Dies hängt jedoch immer noch von den Expressionsniveaus Ihrer Zielproteine in Ihren Proben ab, sodass Sie wahrscheinlich einige Änderungen vornehmen müssen.
How Much Protein Do You Need? Explained by Dr. Berg
